1. 问：条带为什么和其他厂家的 Marker 指示条带不一致？是不是不准？

答：(1) 我们的蛋白 Marker 条带大小均是通过非预染 Marker 进行标定的。

(2) 不同厂家的 Marker 相同大小条带存在差异是正常现象，获得的目的条带的方式可能造成此影响。

(3) 我们内部测试过不同厂家的 Marker，相同凝胶浓度跑胶条带分离情况类似，条带大小差异不大。

2. 问：条带分不开是什么原因造成的？该怎么解决？

答：(1) 请注意选择合适的凝胶浓度，每个浓度的凝胶是有最佳的分离范围的。

(2) 请注意跑胶的时间。跑胶时间过长，可能导致小条带出现重叠在一起；跑胶时间过短，条带还没完全分开。

(3) 请注意上样量，上样量过大，不同大小条带条带过粗，分离可能不清，建议按照说明书推荐上样量。

(4) 请注意闭合电路的完整。确定胶板胶条移除；确定电泳液最终液面到上样孔以上；确定胶板放置正确；确定电泳槽不要漏液。

(5) 请注意使用新鲜电泳液。

3. 问：在跑胶时，蛋白条带清晰，颜色明亮，但转膜后发现条带变淡，抗体剥离液越清洗条带越淡是什么原因？该怎么解决？

答：(1) 转膜不完全。凝胶上还有残留蛋白，导致没有完全转膜。建议延长转膜时间。

(2) 转膜时间过长。转膜时间过长，导致蛋白条带穿过 PVDF 膜，转到了滤纸上，请缩短转膜时间。

(3) 转膜“三明治”结构不紧密，夹子过松，导致转膜闭合电路接触不良，蛋白条带到转膜液中或者没有转上，建议重新换一个夹子。

(4) 抗体剥离液可能会影响蛋白 Marker 条带的亮度，建议在范围内多上些 Marker。

4. 问：ECL 显影发现个别的蛋白 Marker 条带也被显影出来是什么原因？该怎么解决？

答：(1) 请选用特异性好的一抗。可能是非特异标记。

(2) 一抗识别的抗原决定簇是十几个氨基酸序列，可能是蛋白Marker的氨基酸序列是具有相似的结构，所以可能会被标记上。

(3) 请降低一抗的稀释浓度。降低非特异性标记的可能。

5. 问：条带模糊是什么原因造成的？

答：(1) 蛋白上样量过少或者过多都可能导致条带模糊。

(2) 电压过高或电泳时间过长，产热过多导致电泳缓冲液温度升高。

(3) 电泳缓冲液陈旧，pH 值不在缓冲范围内。

(4) 存储或取用不当，导致蛋白降解。

6. 问：蛋白条带消失是什么原因造成的？

答：(1) 保存不当导致的蛋白条带降解。

(2) 电压不稳，可能也会导致蛋白条带消失。