【CRISPR干货】体外sgRNA靶点效率检测到底怎么做？
【CRISPR干货】体外sgRNA靶点效率检测到底怎么做？
十多年前，当研究人员开始解析细菌和古细菌中一个称为 CRISPR 结构的时候，他们并没有预料到这会给基因编辑世界带来一场风暴。 在过去的几年时间里，CRISPR已经迅速席卷了整个生物王国，成为了DNA突变和编辑的一种热门技术，迄今为止，CRISPR方法几乎在每种实验细胞中均能起作用，包括人类细胞，小鼠，大鼠和斑马鱼等细胞。
CRISPR的质粒和病毒大家很常见了，abm公司除了提供高质量的CRISPR质粒和病毒之外，也提供成熟的sgRNA靶点筛选试剂盒（G953），大家也许会问，此试剂盒如何使用呢？ sgRNA靶点筛选试剂盒（G953）可用于在体外快速检测CRISPR中sgRNA靶点效率，以此寻找到敲除效果最好的那个靶点。 接下来小爱给您简述一下如何使用试剂盒进行CRISPR靶点筛选实验，原理如下图，Cas9蛋白可在sgRNA的引导下对双链DNA进行酶切。
abm公司合成的高质量sgRNA（目标DNA上设计3个sgRNA） abm公司合成的DNA模板扩增引物 sgRNA靶点筛选试剂盒（G953） 1. 裂解细胞获得细胞裂解液 2. 细胞裂解液立刻进行下游实验，或储存在-20℃。 3. PCR扩增敲除的DNA模板,反应体系如下： 4. 扩增程序如下： 5. 用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物纯度。 1. 设置如下反应体系： 2. 37℃孵育30分钟，然后分别加入2ul的Protein Degrader在37℃孵育10分钟以降解Cas9蛋白等，更方便下游的琼脂糖凝胶电泳检测分析。 3. 琼脂糖凝胶电泳检测不同靶点的敲除效率，其中阳性对照敲除之后会有1.5kb和0.6kb的两条带。 如下图所示，可以得到在此次设计的3个靶点中，靶点3的效果最好，靶点2的效果次之，靶点1的效果最差。
CRIPSR/Cas9系统不同的sgRNA的切割效率有着比较明显的差异， sgRNA靶点筛选试剂盒（G953）用于快速检测CRISPR靶点敲除效率， 可以在进行耗时费力的 基因敲除细胞系构建或者基因敲除动物等实验之前， 对CRISPR靶点进行验证。 abm公司也提供CRISPR靶点设计以及高质量的sgRNA合成服务， 结合我们的全面优质的CRISPR相关试剂， 可以为科研工作者提供全面系统的帮助。 下面给大家看几个abm的CRISPR产品的应用实例： 案例一 新加坡的研究学者们使用abm的CRISPR慢病毒质粒进行研究， 其结果发表在Nature子刊，影响因子12分的《Nature communications》上。 更多细节，请您拨打我们技术支持的电话0511-83367989转602， 或添加技术老师的QQ，进行咨询， 也可以点击“阅读原文”直接找到对应销售工程师，进行订购：
