爱必梦生物科技有限公司

最新活动

爱必梦最新活动发布及热门活动介绍


  • abm生物预祝各位考生金榜题名,旗开得胜
  • ABM公司CEO Perter先生大学讲座
  • 东南大学病毒主题讲座
  • abm全国巡回讲座现场
  • Science周刊上abm的永生化技术
  1. 新闻动态
  2. 最新活动

    【CRISPR干货】体外sgRNA靶点效率检测到底怎么做?

    【CRISPR干货】体外sgRNA靶点效率检测到底怎么做?



        十多年前,当研究人员开始解析细菌和古细菌中一个称为 CRISPR 结构的时候,他们并没有预料到这会给基因编辑世界带来一场风暴。

        在过去的几年时间里,CRISPR已经迅速席卷了整个生物王国,成为了DNA突变和编辑的一种热门技术,迄今为止,CRISPR方法几乎在每种实验细胞中均能起作用,包括人类细胞,小鼠,大鼠和斑马鱼等细胞。



        CRISPR的质粒和病毒大家很常见了,abm公司除了提供高质量的CRISPR质粒和病毒之外,也提供成熟的sgRNA靶点筛选试剂盒(G953),大家也许会问,此试剂盒如何使用呢?


        sgRNA靶点筛选试剂盒(G953)可用于在体外快速检测CRISPRsgRNA靶点效率,以此寻找到敲除效果最好的那个靶点。


        接下来小爱给您简述一下如何使用试剂盒进行CRISPR靶点筛选实验,原理如下图,Cas9蛋白可在sgRNA的引导下对双链DNA进行酶切。






    实验试剂
    1. abm公司合成的高质量sgRNA(目标DNA上设计3个sgRNA)

    2. abm公司合成的DNA模板扩增引物

    3. sgRNA靶点筛选试剂盒(G953)



    实验步骤




     第一部分 


    1. 裂解细胞获得细胞裂解液


    2. 细胞裂解液立刻进行下游实验,或储存在-20℃。


    3. PCR扩增敲除的DNA模板,反应体系如下:


    4. 扩增程序如下:


    5. 用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物纯度。





     第二部分 


    1. 设置如下反应体系:


    2. 37℃孵育30分钟,然后分别加入2ul的Protein Degrader在37℃孵育10分钟以降解Cas9蛋白等,更方便下游的琼脂糖凝胶电泳检测分析。


    3. 琼脂糖凝胶电泳检测不同靶点的敲除效率,其中阳性对照敲除之后会有1.5kb和0.6kb的两条带。


    如下图所示,可以得到在此次设计的3个靶点中,靶点3的效果最好,靶点2的效果次之,靶点1的效果最差。





    CRIPSR/Cas9系统不同的sgRNA的切割效率有着比较明显的差异,

    sgRNA靶点筛选试剂盒(G953)用于快速检测CRISPR靶点敲除效率,

    可以在进行耗时费力的

    基因敲除细胞系构建或者基因敲除动物等实验之前

    对CRISPR靶点进行验证

    abm公司也提供CRISPR靶点设计以及高质量的sgRNA合成服务,

    结合我们的全面优质的CRISPR相关试剂,

    可以为科研工作者提供全面系统的帮助。


    下面给大家看几个abm的CRISPR产品的应用实例:


    案例一

    新加坡的研究学者们使用abm的CRISPR慢病毒质粒进行研究,

    其结果发表在Nature子刊,影响因子12分的《Nature communications》上。





    更多细节,请您拨打我们技术支持的电话0511-83367989转602,

    或添加技术老师的QQ,进行咨询,

    也可以点击“阅读原文”直接找到对应销售工程师,进行订购:

    image.png



×
abm 微信公众号二维码
在微信上关注我们
在线留言