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    跑一张漂亮的WB胶图?so easy!


    Western Blot

    对于任何一个科研君都不陌生

    But

    为什么别人的实验

    时间短

    跑胶快

    成像显影辣么好看

    活生生的羡慕,嫉妒,哼o( ̄ヘ ̄o#)

    内情你知否?

    除了实验精细化操作

    选择合适最佳的实验试剂

    还有呢?

    当然是

    你的人品!

    呃呃

    手误


    蛋白印迹(WB

    蛋白印迹也称作免疫印迹,是一种被广泛应用并得到公认的技术,用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。

    这一技术利用抗体与特定待检测蛋白的结合,测定生物样本中的蛋白水平。抗体与其靶点蛋白表位的精确结合可用于检测蛋白质中具有高度特异性的氨基酸序列。一句话讲完WB:就是抗原抗体反应!

    WB操作关键步骤

    跑胶与转膜的好坏关系到Western blot最终结果的好坏,小爱今天主要讲的是跑胶与转膜,供大家参考

    跑胶

    加入足量的样品和分子量大小标记物

    SDS-PAGE 根据蛋白电泳迁移率将其分离,我们建议在预制 Tris-Glycine 小孔胶上样20-40μg 全细胞裂解液或100ng纯化蛋白,根据目标蛋白的表达量优化上样量。应在待测样本附近的泳道加入分子量标记物,作为参考点。分子量标记物(或梯状条带)是已知分子量的纯化蛋白的混合物。

    蛋白分子量标准,常称之为蛋白Marker。在免疫印迹(Western blot)试验中,分子量Marker虽不起眼,但意义重大,是阳性对照,是大小的标准,是必须的。只有Marker精确无误了,实验结果才有说服力。除此之外,蛋白Marker还能够提示电泳是否正常,转移是否成功等信息,abm公司的多色预染蛋白Opti-Protein Marker具有大小准确,对比鲜明的特点,其预染色标记可以看见电泳过程中蛋白迁移的距离。

    Opti-Protein Marker应用:

    • 实时监控SDA-PAGE中的蛋白迁移

    • 检验western转膜效率

    • 对蛋白大小进行初略鉴定

    • 呈彩色且转膜效果好

    (蛋白Marker可以申请免费试用装,请点击“阅读原文”,进入申请页面,提供货号最好哦。

    转膜


    1.湿转移

    把蛋白从凝胶转移至膜上的湿转移是指把滤纸-凝胶-膜-滤纸“三明治”完全浸入缓冲液中。使用此方法时,在浸没的情况下通过电泳转移至 0.2 μm 孔径硝酸纤维素膜,在冷却的含 20% 甲醇的转移缓冲液中转膜。


    2.半干转移

    把蛋白从凝胶转移至膜上的半干转移是指将浸满缓冲液的滤纸-凝胶-膜-滤纸“三明治”系统,置于本应干燥的阳极和阴极板上。在这一系统中,转移在桌面上进行,在室温条件下约15-60分钟。转移低分子量和高分子量蛋白时这一系统均运转良好,相较于湿转移所需缓冲液更少,但是在某些情况下会产生更高的背景染色。(转膜时不离人,监测电流电压)


    3.干转移

    把蛋白从凝胶转移至膜的干转移是指不额外加入缓冲液的系统,因为阳极和阴极板系统中含有缓冲液基质。对于较大分子量蛋白,观察到信号差异最大,表明转移效率低。

    (注意:在样本量有限或待检测蛋白低内源水平的情况下,干转移方法会限制您分析的灵敏度。)


    abm的的Opti-Protein Marker可以随着电转移至膜上,由于其预染色的特点,可以用作转膜是否成功的标记,是不是很腻害?

    不同的固相载体对于Western blot结果也有一定的影响,大家对膜的选择可以参考下图。

    同时abm也提供大量WB,IHC,IP,IF等实验中所需要的各种抗体:

    我们的内参好到什么地步呢?看看几张客户的返图吧:

    说好的1:1000稀释比,这位客户!您竟然稀释到了1:2000去用!

    还好我们abm的产品经受住了考验~


    这位客户就更厉害啦,1:5000的稀释比?没事,我们也没在怕~

    友情提示:由于大量稀释后的抗体会很考验使用者的手法和经验,所以1:2000小爱觉得对我们普通人还ok,1:5000就请大神级别的人物再去尝试啦。

    另外,我们的性价比高于Proteintech这种事,我才不会轻易说呢~


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